宿主細胞蛋白（HCPs）對重(zhong)組蛋白藥物的穩定性、安(an)全性和(he)療(liao)效具(ju)有負面影響(xiang)。因此(ci)，確保最終藥物的純度(du)和(he)純化工(gong)藝的一致性至(zhi)關(guan)重(zhong)要，需使用合格且(qie)具(ju)有廣泛反(fan)應的HCP ELISA試劑盒。HCP ELISA檢(jian)測試劑盒(he)必(bi)須滿(man)足兩(liang)個標準，即具有(you)廣泛的反應性(xing)，并且通過方法學驗證。Cygnus HCP ELISA試劑盒是行業的金標準，以下內容詳細介紹了Cygnus HCP ELISA試劑盒的正確實驗操作與方法學驗證流程，幫您高效掌握實驗關鍵。

正確(que)的洗板操作對于降低ELISA實(shi)驗中的變異(yi)和消除背(bei)景干擾至關重要。如果您正在(zai)使(shi)用自(zi)動化(hua)(hua)洗板設備或(huo)實(shi)驗結果的變異(yi)程度高于預期，希望以(yi)下文(wen)章(zhang)能幫助您優(you)化(hua)(hua)實(shi)驗流程，確保實(shi)驗結果回歸正常。

如何(he)用正確的(de)洗板(ban)方法解決ELISA檢測(ce)結果(guo)漂移的問(wen)題？

HCP ELISA檢(jian)測方(fang)法必(bi)須要通過(guo)法規(gui)認(ren)可(ke)的實(shi)驗方(fang)法（ICH或FDA指南(nan)等）進行方法學驗證(zheng)，以確保其能夠產生準確的結果。想要(yao)獲(huo)得準確的HCP ELISA檢測結果(guo)，本質上是(shi)要保證樣品(pin)中HCP的濃(nong)度高于試劑盒的定量下限（LOQ），同時HCP的檢測抗體還要處于過剩狀態，滿(man)足這兩(liang)點就必須要對(dui)檢測樣(yang)(yang)品(pin)（過程樣(yang)(yang)品(pin)和(he)最終的藥物(wu)原液）進行稀(xi)釋(shi)線性驗(yan)證(zheng)。因此(ci)，稀(xi)釋(shi)線性（dilution linearity）是驗證HCP ELISA方法特異(yi)性和準確性的關鍵實驗之(zhi)一(yi)。

HCP ELISA方法驗證(zheng)——稀釋線(xian)性dilution linearity

在ELISA試劑(ji)盒(he)的使用(yong)過程中，確保結果(guo)的準確性(xing)至關重要。為(wei)(wei)了有效識(shi)別樣品配方(fang)與試劑(ji)盒(he)組分之間的兼(jian)容性(xing)，加標回收這(zhe)一關鍵驗證試驗顯得尤為(wei)(wei)重要。它(ta)不僅是評估ELISA試劑盒(he)準確性的重(zhong)要工具，也(ye)是滿足法規(gui)和藥(yao)典(dian)（如ICH或(huo)FDA指南等）對(dui)商品化(hua)ELISA試(shi)劑(ji)盒方法學驗證要求的可靠方式。

HCP ELISA方法驗證——加標(biao)回收（Spike & Recovery）

空白對照是指在(zai)(zai)實驗設計(ji)中設置的一種陰性對照，旨在(zai)(zai)監測非(fei)特(te)異性背景(jing)信號(hao)，并為基線(xian)吸光度值提供參考。在(zai)(zai)酶(mei)聯免疫(yi)吸附測定（ELISA）中(zhong)，通過引入空白對照，可(ke)以(yi)有效識別(bie)并(bing)扣除樣品讀數中(zhong)的背景噪(zao)聲，從而提高檢測結果(guo)的準(zhun)確(que)性。然(ran)而，在多分析物ELISA測(ce)定中，由于其固有的高背景信號特性，這種(zhong)標準化方法(fa)可能并不適用。下文將(jiang)詳(xiang)細探討為何在Cygnus的ELISA測(ce)定中通(tong)常(chang)不建議使用(yong)空(kong)白對照。

使用Cygnus ELISA試(shi)劑盒該(gai)如(ru)何設置空白對照？

ELISA是各國藥典推薦的在(zai)生物制品中檢測殘(can)留HCPs的(de)方法，可以測定HCPs的總量。并且ELISA的(de)操(cao)作簡(jian)便，是(shi)經典的(de)免疫學檢測方法。但ELISA檢測HCPs也有方法的(de)局限性(xing)，比如不能從ELISA的結果中知道樣(yang)品中有哪些HCPs，或者(zhe)用于檢測的抗體(ti)與哪些HCPs發生了(le)免(mian)疫反應。因此，監管部(bu)門(men)要求在使用ELISA檢測(ce)過程中HCPs殘留含量時，不僅要(yao)通過方法(fa)學驗證(zheng)(zheng)證(zheng)(zheng)明試劑(ji)盒(he)的(de)準確度(du)，精(jing)密度(du)，靈(ling)敏度(du)等，而且還需要(yao)證(zheng)(zheng)明使用的(de)HCPs抗體(ti)有廣(guang)泛的反應性(xing)，即(ji)HCPs抗體(ti)覆(fu)蓋率(lv)。通過(guo)AAE-MS方法來識別最終藥物中的(de)高風險HCPs信(xin)息，進而(er)確保這些(xie)HCPs能夠被檢(jian)測(ce)到。在完成以上所有方法(fa)(fa)學驗證(zheng)步驟后，該免(mian)疫檢(jian)測(ce)方法(fa)(fa)就可用于過(guo)程樣(yang)品監控(kong)和產品的批次放行。這個決策(ce)流程對于開發和驗證(zheng)通用型或(huo)工藝專屬型HCP ELISA方法很有幫助，它(ta)展示了如何將正(zheng)交AAE和MS方法相(xiang)結合，通過(guo)數據來(lai)決定(ding)哪(na)種類型的(de)檢測方法更適用于您的(de)項目。

抗體親和(he)提(ti)取(AAE?)：革新宿主細胞(bao)蛋(dan)白(HCPs)分析的新(xin)篇章